题目
对核酸进行限制性酶切时应注意什么?
提问时间:2021-02-04
答案
影响限制性内切酶的因素:
DNA制品中的污染(蛋白质、酚、氯仿、乙醇、EDTA、SDS)
解决办法:
增加酶反应体积以稀释可能的抑制剂
增加酶作用单位(过多的甘油抑制酶活性)
延长反应时间 (1-16小时)
酶的星号活性*:改变酶切条件时酶的识别位点专一性下降的现象.
限制性内切酶识别特异性放宽.
EcoRⅠ在正常情况下识别GAATTC序列发生切割,但如果缓冲液中甘油浓度超过5%,其识别位点发生松动,可在AATT处发生切割,EcoRⅠ这种特殊的识别能力叫做星活性,用EcoRⅠ*表示.星活性可造成位点切割机率不等,降解不完全.
影响因素:甘油浓度12-20%,酶与DNA比例,离子强度,45%聚乙二醇(PEG),有机溶剂,8%二甲基亚枫,二价阳离子,12%乙醇.
DNA制品中的污染(蛋白质、酚、氯仿、乙醇、EDTA、SDS)
解决办法:
增加酶反应体积以稀释可能的抑制剂
增加酶作用单位(过多的甘油抑制酶活性)
延长反应时间 (1-16小时)
酶的星号活性*:改变酶切条件时酶的识别位点专一性下降的现象.
限制性内切酶识别特异性放宽.
EcoRⅠ在正常情况下识别GAATTC序列发生切割,但如果缓冲液中甘油浓度超过5%,其识别位点发生松动,可在AATT处发生切割,EcoRⅠ这种特殊的识别能力叫做星活性,用EcoRⅠ*表示.星活性可造成位点切割机率不等,降解不完全.
影响因素:甘油浓度12-20%,酶与DNA比例,离子强度,45%聚乙二醇(PEG),有机溶剂,8%二甲基亚枫,二价阳离子,12%乙醇.
举一反三
我想写一篇关于奥巴马的演讲的文章,写哪一篇好呢?为什么好
奥巴马演讲不用看稿子.为什么中国领导演讲要看?
想找英语初三上学期的首字母填空练习……
英语翻译
1,人们染上烟瘾,最终因吸烟使自己丧命.
最新试题
- 1this question is very ( )i can work it out( )
- 2有没有一本书是父亲写给儿子的书?是父亲写给儿子的
- 3两车同时从A B两地出发 相对而行已知甲车行完全程比乙车多用1.5时甲车每小时行40千米乙车每小时行50千米车
- 4若A△B=3A-2B求6△(4△5)
- 5tanα=2,3/4sin²α+1/2cos²α等于多少
- 6做一个容积为256dm三次方的方底无盖水箱,它的高为什么时最省料
- 7She _the national table telmis team in 1988.Ajoined in Bjoined Ctook part in Dtook part
- 8He is a man who always means what he says.这句话的means怎么解释,如果这句话这么说对不对?he is a man who he says always m
- 9He studies English hard__he can get good grade
- 10英语翻译
热门考点