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题目
如何冻存细胞

提问时间:2021-01-10

答案
一、材料
  (一)仪器   1.净化工作台   2.离心机   3.恒温水浴箱   4.冰箱(4℃、-20℃、-70℃)   5.倒置相差显微镜   6.培养箱   7.液氮冰箱   (二)玻璃器皿   1.吸管(弯头、直头)   2.培养瓶   3.玻璃瓶(250ml、100ml)   4.废液缸   (三)塑料器皿   1.吸头   2.枪头   3.胶塞   4.移液管(10ml)   5.15ml离心管   6.冻存管(1~2ml)   (四)其他物品   1.微量加样枪   2.红血球计数板   3.记号笔   4.医用橡皮膏   5.移液枪   (五)试剂   1.D-Hanks液   2.小牛血清   3.培养液   4.双抗(青霉素、链霉素)   5.胰蛋白酶(0.08%)   6.1NHCl   7.7.4%NaHCO3   8.DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油
二、操作步骤
  (一)细胞冻存   1.配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液;   2.取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、;   3.离心1000rpm,5min;   4.去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml;   5.将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5 ml;   6.在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者;   7.冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/   min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中.也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内.  (二) 细胞复苏   1.从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化.  2.从37℃水浴中取出冻存管,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管并滴加10倍以上培养液,混匀;   3.离心,1000rpm,5min;   4.弃去上清液,加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养;   5.次日更换一次培养液,继续培养.
三、注意事项
  1.从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存,但最好为对数生长期细胞.在冻存前一天最好换一次培养液;   2.将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤;   3.冻存和复苏最好用新配制的培养液.
举一反三
我想写一篇关于奥巴马的演讲的文章,写哪一篇好呢?为什么好
奥巴马演讲不用看稿子.为什么中国领导演讲要看?
想找英语初三上学期的首字母填空练习……
英语翻译
1,人们染上烟瘾,最终因吸烟使自己丧命.
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