题目

嵌套式 PCR第二步反应无产物?
嵌套式PCR怎么稀释第二部的产物?我试过2倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、100倍,都没有条带.第一次pcr有条带,不过较淡.是用无菌水稀释没错吧?然后做为第二部的模板再次PCR?是用无菌水稀释对么?我没有做梯度和touch down.第一次是做16S,用通用引物,第二次是内引物.文献上用相同方法做出来的,我却重复不出来温度我用的就是按照文献上的,是不是温度太高了?需要做温度梯度么?怎样设计呢?

提问时间：2021-03-12

答案

博凌科为-为你我做的时候直接取第一步的产物1~2ul来作为第二轮的模板,不过做了touch down.一直都没问题,条带很清晰.