题目

某实验员对蓝细菌进行紫外诱变,目的为了找到腺嘌呤营养缺陷型蓝细菌菌株?请简述他应该如何设计这个实验?请详细说明.（其中缺陷性的检出步骤,请你只选择一种方法即可）

提问时间：2021-02-03

答案

一) 实验器材和用品　　
1．菌种　　
大肠杆菌（Escherichiacoli）K12SF+　　
2．培养基　　
1) LB液体培养基： 10 mL/三角瓶 *4　　
2) 2倍LB液体培养基: 3 mL/管 *2　　
3) LB固体培养基： 250 mL/三角瓶 *1 　　
4) 基本固体培养基： 300 mL/三角瓶 *1 　　
5) 无N基本液体培养基：5 mL/三角瓶 *1　　
6) 2N基本液体培养基： 5 mL /管 *1　　
3．混合氨基酸和混合维生素　　
氨基酸分七组,其中6组每组6种氨基酸,每种氨基酸等量研细充分混合（若所用氨基酸为dl型,量需加倍）.　　
　 　
Ⅰ　　
赖　　
精　　
甲硫　　
半胱　　
嘌　　
胱　　

Ⅱ　　
组　　
精　　
苏　　
谷　　
天冬　　
嘧　　

Ⅲ　　
丙　　
甲硫　　
苏　　
羟脯　　
甘　　
丝　　

Ⅳ　　
亮　　
半胱　　
谷　　
羟脯　　
异亮　　
缬　　

Ⅴ　　
苯丙　　
胱　　
天冬　　
甘　　
异亮　　
酪　　

Ⅵ　　
色　　
嘌　　
嘧　　
丝　　
缬　　
酪　　

Ⅶ　　
脯　　

Ⅷ　　
混合维生素（B1、B2、B6、泛酸、对氨基苯甲酸,烟碱酸及生物素等量研细,充分混合）　　

1. 菌液制备：将大肠杆菌K12接种于装有10mlLB培养基的三角瓶中,37oC过夜培养.取0.3ml接于10mlLB培养基的三角瓶37oC培养5h.分装于2个5ml的离心管中8000r/min,3次；弃上清各加2ml的生理盐水,打匀,混合,制成4ml菌悬液.　　
2. uv诱变：3ml菌悬液倒入小培养皿（　7cm　）内,将培养皿至于紫外灯下,连同盖一起灭菌1min,然后打开皿盖照射3-4min.加入3ml的　2LB　培养基,然后暗箱培养12小时以上.　　
3. 青霉素淘汰野生型：取3ml菌液,8000r/min离心3min收集菌体.加4ml生理盐水离心洗涤三次,制成3ml菌液.取0.1ml,加到无N基本培养基（5ml）,37oC培养12h以上.然后加2N基本培养基5ml和适量的青霉素钠盐,37oC培养.　　
4. 缺陷性的检出与培养：12、16、24小时的培养物中分别取0.1ml进行涂布（LB、基本培养基各一个）37oC培养36-48小时.选择选取完全培养基上的菌落数大大超过基本培养基的那一组,用灭菌牙签跳去完全培养基上长出的菌落200个分别点种与基本与完全培养基平板上,线基本后完全.37oC培养.　　
5. 复证：挑取LB培养基上有而基本上没得菌落,在基本培养基上划线复证,并在完全培养基上保留备份.24小时后仍不长的为缺陷型.　　
6. 鉴定：待测缺陷型接于10mlLB中, 37oC培养12-16小时.8000r/min离心3min收集菌体,加入4ml生理盐水离心洗涤.制成4ml菌悬液.取1ml倾注基本平板,皿底分9格,用接种环依次放入氨基酸及维生素,其中一格作为对照不接入任何的营养物质,37oC培养2h
可能比较复杂 不好意思 这是我尽力了
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