题目

呵呵,提取RNA过程?

提问时间：2020-12-23

答案

现在常用的是Trizol法.
提前将研钵、研棒、剪刀、镊子等用锡箔纸包好200度烘烤6小时,与实验前放到冰箱中预冷.枪头、离心管等DEPC水浸泡处理12小时后,高温灭菌30分钟（也可不用DEPC处理,常规高温灭菌40分钟）,整个处理过程必须带手套（最好带口罩）,否则环境中的RNA酶会降解RNA.
1、取鲜样或者在-80度保存样品,液氮研磨样品至细小粉末,0.1g样品加入1mlTrizol混匀,室温静置5分钟.
2、12000rpm离心十分钟,取上清至一新的离心管中,加入0.2ml氯仿剧烈晃动15秒,室温静置2-3分钟
3、12000rpm离心十分钟,取上清至一新的离心管中,加入等体积异丙醇,混匀,室温静置10分钟
4、12000rpm离心十分钟,去除上清,用70%乙醇清洗2次,7500rpm离心五分钟,晾干.（不可过分干燥否则不易溶解）
5、加入适量DEPC水溶解沉淀