题目

关于PCR溶液体系的配制
每个PCR反应包括25 ng模板DNA,0.5 μmol/L正反向引物,0.2 mmol/L dNTP mix,0.5个单位的Taq DNA聚合酶和1×PCR buffer（Fermentas）,反应体系为10μl.请问每个试剂应该去多少,buffer试剂是10的.

提问时间：2020-11-20

答案

加入量和浓度有关,只要知道每一个要加入物质的浓度就可以算出来了：

模板的体积=25ng/模板的浓度 （这个值需要测定,如果实在不知道模板浓度,就加0.1-0.5ul左右吧）

引物的体积=0.5umol/1000uL * 10uL / 引物浓度 （根据自己配制的情况,有时候可能是100mM或者是200mM）

Taq酶体积= 0.5 U / Taq 酶活力单位浓度（标注在管子上,U/uL表示的数字）

Buffer的量应该是1uL.（这里需要解释一下,经过确认,没有1X的buffer,因为如果是1X的话,没法加了,所以正确的应该是10X的buffer,加入量就是稀释10倍,所以10uL体系加1uLbuffer）