题目

DNA的离心原理
我现在做提取纯化宏基因组DNA,然我看了个文献,它里边说“用六层纱布过滤获得瘤胃液.1.随后取350 μL瘤胃液,加1 mL PBS,离心3min（9,000 g,4℃）,弃去上清（此步骤重复3次）.
2.沉淀加1 mL PBS重悬后离心3 min（200 g,4℃）.取上清至另一管中离心5 min（200 g,4℃）,然后再取上清至另一管中,离心3 min（9,000 g,4℃）.
3.弃去上清,加1 mL STE（0.2%去氧胆酸钠,1%月桂酰肌氨酸钠,5 mg/mL溶菌酶,pH8.0）重悬,离心3 min（9,000 g,4℃）,3次.
4.弃去上清,用0.125 mL STE重悬.”我就很迷惑第一步骤的离心（9000g）是去除什么物质?时间是怎么把握?这里的PBS有啥作用?第二步骤中离心（200g）中取了个上清液,是只得到了试验用的微生物还是蛋白质和微生物共同存在?还有再以9000g下离心到底去除什么物质?第三步骤中加STE来离心,这样做的目的?整个步骤中的重悬有啥作用?　请高手们给我个你们的宝贵的指点.在这求你们啦

提问时间：2020-11-11

答案

9,000 g离心得到的是细胞碎片,微生物还有较少的杂质,蛋白质被除去,大多数密度较小的杂质被除去；200 g离得是杂质,上清液中是所要的细胞,微生物.需要反复离心纯化.PBS具有盐平衡、适宜pH缓冲作用,也就是对生物制剂有个保护作用.用STE是使微生物裂解释放DNA,离心收集.重悬就是获得液体环境,进行下一步实验.至于离心时间不是参考值,就是经验值,基本都是这样吧.可以查一下细胞内物质的离心参数