叶绿体色素的提取和分离

　　(1)各种色素能溶解在有机溶剂(无水乙醇等)中形成溶液，使色素从生物组织中脱离出来。

　　(2)各种色素都能溶解在层析液中，但在层析液中的溶解度不同。溶解度大的色素分子随层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢，因而不同色素可以在滤纸上通过扩散分开，各种色素分子在滤纸上可形成不同的色素带。

　　滤纸条上色素带有四条，由上到下分别是胡萝卜素、黄色的叶黄素、蓝绿色的叶绿素、黄色的叶黄素、蓝绿色的叶绿素a、黄绿色的叶绿素b，

　　1、实验中几种化学药品的作用

　　①加入少量SiO2，可破坏细胞结构，使研磨更充分，便于色素完全释放。

　　②加入少量CaCO3，，可以中和细胞内的有机酸，防止有机酸夺取叶绿素中的镁离子使叶绿素破坏，从而起到保护色素的作用。但SiO2.和CaCO3的加入量要少，否则滤液杂质多、混浊、颜色浅，实验效果差。 2、实验成功的关键

　　①叶片要新鲜，颜色要深绿，保证色素的含量。

　　②研磨要迅速充分。叶绿素不稳定，易被破坏，时间过长或研磨不充分都会导致色素的量太少而使实验失败。

　　③滤液细线不仅要求细、直、均匀，而且要求含有较多的色素(可以重复画二至三次)。

　　④滤液细线不能触及层析液，否则色素溶解到层析液中，将得不到清晰的色素带。

　　3、注意事项

　　①制备滤纸条时，要剪去两角，这样可以减小边缘效应，使色素在滤纸上扩散均匀，便于观察实验结果。 ②收集滤液后，要及时用棉塞将试管口塞紧，防止滤液挥发。

　　4、滤纸条上的滤液细线，不能触及层析液的原因：滤纸条上的滤液细线如触及层析液，滤纸上的叶绿体色素就会溶解在层析液中，实验就会失败。

　　5、提取和分离叶绿体色素的关键：

　　(1)提取叶绿体色素的关键是：①叶片要新鲜、浓绿;②研磨要迅速、充分;③滤液收集后，要及时用棉塞将试管口塞紧，以免滤液挥发。

　　(2)分离叶绿体色素的关键是：①是滤液细线要细且直，而且要重复划几次;②是层析液不能没及滤液线。

　　6、收集到的色素滤液绿色过浅，可能原因如下：

　　①未加二氧化硅，研磨不充分。

　　②使用放置数天的菠菜叶，滤液中色素(叶绿素)太少，绿色过浅。

　　③一次加入大量的95%的乙醇，提取浓度太低(正确做法：分次加入少量95%的乙醇提取色素)。

　　④未加碳酸钙或加入过少导致色素分子被破坏。

　　7、如果滤纸条色素带重叠，原因可能是滤纸条上的滤液细线接触到层析液。