题目

【求助/交流】请问大家：将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊?

提问时间：2021-05-05

答案

恩.同意沙发.体系越小越好.一般5-10微升.然后关键就是载体和外源DNA的比例,一般他们的分子数比例为1:3.所以你要对DNA和载体进行定量. 这个DNA和载体进行定量是怎么个定量法呀?walker2898(站内联系TA)体系一般用10微升体系,具体构成得根据你的DNA和载体的浓度,测浓度可以电泳进行粗估,根据条带的亮度和marker的亮度进行比对确定浓度,一般载体和DNA的浓度比在1:3-1:8都可以,宝生物的一般T4DNA连接酶最好16度过夜连接,转化时加5微升即可.nuoyaeva(站内联系TA)...比如我用的Invitrogen的试剂盒,他给出的最佳mol比是10：1,然后你你根据你片段和载体的核苷酸数,算出你要加的ng数（根据说明书里的公式）,再根据你片段的浓度算出体积数
然后拍照.