题目

重组质粒已成功转入大肠杆菌内,-20°冻存,怎样复活,扩大培养?

提问时间：2021-05-04

答案

首先要进行菌种活化,可以先从保存的菌种液中吸5ul,接种到加入了相应抗生素的5ml LB培养基中,200转每分钟,37摄氏度过夜.
然后根据需要,如果要扩大培养,就按1:100的比例接种到大瓶的LB培养基（加抗生素）中,37°C 200转每分钟.然后你需要诱导啊什么的就等它的OD600到0.8-1.0左右进行就可.一般这个时间在4-6小时左右.
如果是为了抽提质粒,小抽5ml就可以,高拷贝质粒一般可以抽到10-40ug.大抽的话就用扩大培养的菌液进行抽提就好.
如果说菌种有老化的现象,活力不高,那么就在5ml培养结束后取100ul涂平板,12h后挑生长旺盛的单克隆再进入5ml LB 培养基中培养.
希望能够帮到你~有问题一起讨论解决哦~