题目
细胞冻存融化怎样操作?为什么?
提问时间:2021-04-01
答案
细胞冻存融化的原则是缓冻速融
细胞冻存(慢)
1.预先配制冻存液:10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷;
2.用胰酶对细胞进行消化:倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,PBS冲洗两次,用胰酶消化细胞(尽可能温和);
3.将预冷的冻存液悬浮细胞,用滴管轻轻吹打混匀.
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐)最好;或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐.
细胞冻存管融化(快)
1.将细胞冻存管取出,浸入37℃水浴锅内,轻轻晃动,注意融化,当融得只剩一个小冰块时,将细胞插入冰中.
2.加入4℃预冷的培养基,用手指轻弹悬浮细胞团.
3.250g离心10min,去除上清液,再加入培养基,轻轻悬浮.
4.尽量将细胞中的DMSO洗去,计数.
在细胞冻存过程中,所结的冰晶对细胞伤害较大,所以过程一定要慢,DMSO能减少冰晶伤害.
在细胞复苏过程中,要快,以减少融化对细胞的伤害,其实还是冰晶的问题.DMSO浸润的细胞非常脆弱,所以可要尽快将DMSO去除,一定要轻.
细胞冻存(慢)
1.预先配制冻存液:10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷;
2.用胰酶对细胞进行消化:倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,PBS冲洗两次,用胰酶消化细胞(尽可能温和);
3.将预冷的冻存液悬浮细胞,用滴管轻轻吹打混匀.
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐)最好;或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐.
细胞冻存管融化(快)
1.将细胞冻存管取出,浸入37℃水浴锅内,轻轻晃动,注意融化,当融得只剩一个小冰块时,将细胞插入冰中.
2.加入4℃预冷的培养基,用手指轻弹悬浮细胞团.
3.250g离心10min,去除上清液,再加入培养基,轻轻悬浮.
4.尽量将细胞中的DMSO洗去,计数.
在细胞冻存过程中,所结的冰晶对细胞伤害较大,所以过程一定要慢,DMSO能减少冰晶伤害.
在细胞复苏过程中,要快,以减少融化对细胞的伤害,其实还是冰晶的问题.DMSO浸润的细胞非常脆弱,所以可要尽快将DMSO去除,一定要轻.
举一反三
已知函数f(x)=x,g(x)=alnx,a∈R.若曲线y=f(x)与曲线y=g(x)相交,且在交点处有相同的切线,求a的值和该切线方程.
我想写一篇关于奥巴马的演讲的文章,写哪一篇好呢?为什么好
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