题目
已知动物PRL基因序列如何设计引物 已解决
提问时间:2021-02-28
答案
2,上游引物设计:选取正向5’-3’的基因序列约23bp左右,copy下来;在这段序列的5’端加上你的上游酶切位点(一般6bp),再在之前加入两个任意碱基作为保护碱基;序列为:保护碱基(2bp)+上游酶切位点(6bp)+基因起始序列5’-3’,引物碱基总长约28-30bp.
3,下游引物设计:将序列反相互补,得到互补链序列,选取5’-3’的基因序列约20bp左右,同样在5’端加上下游酶切位点和保护碱基;一般情况下还需要在酶切位点和基因之间加上stop codon.序列为:保护碱基(2bp)+下游酶切位点(6bp)+stop codon(3bp)+基因互补序列起始序列5’-3’,引物碱基总长约28-30bp
4,检查:(1)引物长度;(2)上游酶切位点是否移码,如果移码,则应增加1-2个碱基恢复读码框;(3)如果下游没有设计终止密码子,也应检测是否移码,PCR能否顺利终止,不行则休正;(4)退火温度,一对引物的退火温度不能相差太大,否则应调节碱基使之满足要求.
3,下游引物设计:将序列反相互补,得到互补链序列,选取5’-3’的基因序列约20bp左右,同样在5’端加上下游酶切位点和保护碱基;一般情况下还需要在酶切位点和基因之间加上stop codon.序列为:保护碱基(2bp)+下游酶切位点(6bp)+stop codon(3bp)+基因互补序列起始序列5’-3’,引物碱基总长约28-30bp
4,检查:(1)引物长度;(2)上游酶切位点是否移码,如果移码,则应增加1-2个碱基恢复读码框;(3)如果下游没有设计终止密码子,也应检测是否移码,PCR能否顺利终止,不行则休正;(4)退火温度,一对引物的退火温度不能相差太大,否则应调节碱基使之满足要求.
举一反三
已知函数f(x)=x,g(x)=alnx,a∈R.若曲线y=f(x)与曲线y=g(x)相交,且在交点处有相同的切线,求a的值和该切线方程.
我想写一篇关于奥巴马的演讲的文章,写哪一篇好呢?为什么好
奥巴马演讲不用看稿子.为什么中国领导演讲要看?
想找英语初三上学期的首字母填空练习……
英语翻译
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