题目

有别人构建好的含有目的基因的表达载体质粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因?

提问时间：2021-02-05

答案

第一个办法 ,如果你有这个载体的通用引物,可以用这俩通用引物做PCR,然后电泳观察条带的大小,如果条带和你的mRNA的大小相近（应该是略大于mRNA的,因为带有了小部分的载体序列）,那就说明这里边是插入目的基因的.
第二个办法,如果你能知道这个基因插入位点的酶切位点是什么的话,可以做双酶切来做鉴定,之后跑电泳看切出来的条带大小是否符合,注意如果切得完全的话应该是两条带,后边较大的是载体,前边的是你的mRNA.
如果没有通用引物但是有这个mRNA的两端引物,有人可以用这俩引物来PCR,但是这个方法不推荐,因为可能有没连接进去的rna污染会出现假阳性,因此一般还要配合酶切鉴定.