题目
为了提高感受态细胞的转化率,实验中需要考虑哪些因素?
最好能举点例子
最好能举点例子
提问时间:2021-01-31
答案
影响感受态细胞转化效率的因素及实际操作过程中应注意的事项:
1.细菌的生长状态:实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞(一般通过检测OD600来控制.DH5α菌株 OD600为 0.5 时细胞密度是 5 × 107/ml );
2.所有操作均应在无菌条件和冰上进行;
3.经 CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加,24小时达到最高,之后转化率再下降(这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的);
4.化合物及无机离子的影响:在 Ca2+的基础上联合其他二价金属离子(如 Mn2+或 Co2+)、 DMSO 或还原剂等物质处理细菌,可使转化效率大大提高( 100-1000 倍);
5.所使用的器皿必须干净.迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率;
6.质粒的大小及构型的影响:用于转化的应主要是超螺旋的 DNA ;
7.一定范围内,转化效率与外源 DNA 的浓度呈正比;
1.细菌的生长状态:实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞(一般通过检测OD600来控制.DH5α菌株 OD600为 0.5 时细胞密度是 5 × 107/ml );
2.所有操作均应在无菌条件和冰上进行;
3.经 CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加,24小时达到最高,之后转化率再下降(这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的);
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