题目

通过设计带酶切位点的PCR引物来使目的片段添加限制性酶切位点的原理是什么?百思不得其解,
我的意思是说引物人为添加上的酶切位点与要扩增的片段也不匹配,怎么能随着引物克隆到目的片段上,而使目的片段带上酶切位点的序列呢?原理是什么呢?

提问时间：2021-01-14

答案

不是随意添加.酶切位点都加在引物的5‘端.这样在第一轮扩增后,就会产生有酶切位点的产物了(酶切位点在产物的两端）.在接下来的扩增中每个产物就都会有了.PCR的时候可以耐受引物的5‘端由数个不匹配的碱基对.但是随着扩增的进行,产物都有这些位点后,就不存在不匹配的问题了