题目

细胞冻存的操作步骤

提问时间：2021-01-10

答案

细胞冻存
1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷；
2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,PBS冲洗两次,用胰酶消化细胞（尽可能温和）；
3.再次用完全培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀.
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐）最好；或者可以在4℃,2h；然后转到-20℃,2h；-80℃,2h；放入液氮罐.
这是我实验中用的protocol,