题目

大肠杆菌染色体实验中为什么提取不出DNA?那个步骤出问题了呢?

提问时间：2020-12-28

答案

（1）将2mL培养至对数期的大肠杆菌DH5α菌液5000rpm冷冻离心10min弃上清；
（2）加190μL TE悬浮沉淀,并加10μL 10%SDS,1μL 20mg/mL蛋白酶K,混匀,37℃保温1h；
（3）加30μL 5mol/L NaCl,混匀；
（4）加30μL CTAB/NaCl溶液,混匀,65℃保温20min；
（5）加入300μL酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提,5000rpm离心10min,将上清液移至干净离心管；
（6）加入300μL氯仿/异戊醇（24：1）抽提,取上清液移至干净管中；
（7）加300μL异丙醇,颠倒混合,室温下静止10min,沉淀DNA；
（8）5000rpm离心10min,沉淀DNA,加入500μL70%乙醇,5000rpm离心10min,弃乙醇,吸干；
（9）溶解于20μLTE,取3μL 用于琼脂糖凝胶电泳验证,其余-20℃保存.