题目

pcr需要注意的问题

提问时间：2020-12-05

答案

PCR需要注意以下事项：
1.模板
尽量避免含有酶抑制剂!
2.引物
保存时间不易过长,要符合引物涉及的原则,在用软件设计结束后要进行适当的人工处理.引物浓度要合适,太高容易引起错配及非特异性产物的形成.
3.循环参数
一般退火温度应低于Tm值5℃.先循环数次,然后延伸几分钟,再进行循环,有时候可以加大产物的量
4.酶浓度
过高容易导致非特异性产物的形成
5.离子浓度
过高容易导致非特异性产物的增加
6.dNTP
浓度过高会抑制酶的活性,引起错配