题目

1.在微生物的培养中,稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目,而在分离分解纤维素的微生物的实验中并不需要统计样品中活菌的数目,为什么也要
进行梯度稀释呢?
2.在分离分解纤维素的微生物的实验中用到刚果红（CR)染色法,是在长出菌落的培养基上,覆盖1mg/mL的CR溶液,10~15min后,倒去CR溶液,为什么又要加入1mol/L的NaCl溶液,15min后倒去NaCl溶液呢?
3.在血红蛋白的提取和分离的实验中,在洗脱时,将1mL透析后的样品加到色谱柱的顶端,等样品完全进入凝胶层后,为什么又要加入20mmol/L的磷酸缓冲液到适当高度并连接缓冲液洗脱瓶呢?连接的缓冲液洗脱瓶的出口在洗脱过程中是一直打开的吗?

提问时间：2020-10-16

答案

很久没有做微生物实验了,这些生物实验的每一个步骤都是有其原理的：
1微生物培养的分离步骤是为了从含有目的微生物的源物质中找到目的微生物,所以需要将目的微生物与其他微生物分开,所以要做到,之后的划平板的时候可以形成纯的单菌落,（也就是说划线的时候要保证溶液足够稀释,最好可以使每条线上只有一个或两个目的微生物就够了）如果很多的话,就会跟杂菌混长,这样无法分离出纯的菌种了.
2这个实验我没有做过,但是,类似的实验倒是不少,我所查的方法上面,没有用到NACL的,我根据这个实验的原理,是指用CR来染培养基,而不是菌落,那样容易使细菌混杂,所以第一次哦加cr是让培养基吸收,之后加nacl可能就是要出去没有被培养基吸收的cr的作用.可以询问实验设计的老师.
3加样之后加缓冲液是必要的,一是为了保证色谱柱上表面不会干裂,二是保证在洗脱的时候,从洗脱瓶流过来的缓冲液不至于将凝胶表面滴破冲坏,起到缓冲作用,因为整个洗脱过程,我们必须保证胶面的水平,这是影响洗脱结果的关键（水平是为了样品在同一个起跑线,使分离更有效.）