题目

如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线（包括基因和载体的连接、转化和鉴定）和关键点.

提问时间：2020-10-13

答案

已经得到扩增的目的基因片段和克隆载体→对两者分别进行酶切（选要相同的限制性内切酶对两者进行切割）→酶切产物经琼脂糖凝胶电泳回收→克隆载体和目的基因进行连接（一般选用T4连接酶）→大肠杆菌感受态细胞的制备（常见的有氯化钙法）→转化（将重组载体导入感受态细胞中）→将上一步得到的大肠杆菌进行涂板,倒置培养18-20个小时→筛选和快速鉴定（直接挑取单克隆菌落,进行菌落PCR,电泳检测PCR产物,挑取阳性克隆的菌落）