题目

一个单链DNA和一个单链RNA分子量相同,可以用那几种方法将他们分开

提问时间：2020-10-09

答案

1.DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚来沉淀
这是最简单的方法.
2.利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA.吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定,非固定细胞核酸,或作溶酶体的一种标记.观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体.虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果,但该方法已被许多实验室广泛采用.
下面是生物化学的总结知识
1.两性解离：DNA无,只有酸解离（○P）,碱基被屏蔽（在分子内部形成了H键）.
RNA有,有PI.
2.粘度大：DNA>RNA,粘度由分子长度/直径决定,DNA为线状分子,RNA为线团.
3.碱的作用：DNA耐碱
RNA易被碱水解.
4.显色反应：鉴别DNA和RNA
浓HCl 浓HCl
RNA ------→ 绿色化合物 DNA ------→ 蓝紫色化合物
苔黑酚 二苯胺
啡啶溴红（荧光染料）和溴嘧啶都可对DNA染色,原理是卡在分子中,DNA的离心
和电泳显色可用它们.
5.溶解性：都溶于水而不溶于乙醇,因此,常用乙醇来沉淀溶液中的DNA和RNA.DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚来沉淀RNA.
6.紫外吸收：核酸的λm＝260nm,碱基展开程度越大,紫外吸收就越厉害.
当A＝1时,DNA：50ug/ml,RNA和单链DNA：40ug/ml,寡核苷酸：20ug/ml.
用A260/A280还可来表示核酸的纯度：>1.8,DNA很纯；>2RNA很纯.
7.沉降速度：对于拓扑异构体（核苷酸数目相同的核酸）,其沉降速度为：
RNA > 超螺旋DNA > 解链环状DNA > 松弛环状DNA > 线形DNA
也就是在离心管中最上层是线形DNA,最下面是RNA.
8.电泳：核苷酸、核酸均可以进行电泳,泳动速度主要由分子大小来决定,因此,电泳是测定核酸分子量的好方法.
9.DNA分子量测定最直接的方法：用适当浓度的EB（溴嘧啶）染色DNA,可以将其他形式的DNA变成线形DNA,用电镜测出其长度,按B-DNA模型算出bp数,根据核苷酸的平均分子量就可计算出DNA的分子量