题目

pcr退火温度一般为多少?

提问时间：2020-10-03

答案

唉,这种题就是中国特色,完全理论脱离实际.
PCR退火温度是一个范围,一般是50度到65度,或者到70度做两步法PCR.其中,模板的GC含量、模板的组成（单一模板还是cDNA还是全基因组DNA还是别的什么）等等条件都会影响tm值.没有一个确定的说是多少比较好,都是具体情况具体分析.有的时候引物设计回来,还要做温度梯度测验,设计的tm不一定就是最适合的tm.不得不说这题直接问一个数,纯属是闭门造车,一点实验经历都没有只凭空想,答对了也没有得到任何有用的知识.
好了,如果非要说一个数的话,那么习惯上是55度左右.选项中我更倾向于56度的答案.50度还是偏低,对于稍微复杂的模板来说,非特异性扩增的可能性会增大.