题目

DNA binding Buffer中的poly-dIdC是什么有什么作用?
分子生物学中,看到DNA-蛋白相互作用实验中用到了DNA binding Buffer,其中的poly-dIdC是什么有什么作用?

提问时间：2020-08-02

答案

poly(dI:dC)（dI:dC),非特异性竞争DNA,特异性竞争DNA的功能是什么?
它由肌苷和胞嘧啶组成.由于其特定的结构,可抑制蛋白对标记探针的非特异结合,避免假复合物. 在凝胶迁移反应中加入poly(dI:dC)（dI:dC),可抑制粗制核抽提液中其它DNA结合蛋白结合,比如转录调节因子的非特异结合.当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时,不必一定加入poly(dI:dC)（dI:dC),如加入,则普通反应中所用终浓度不超过50-100ng.对核抽提液,每2-3ug核抽提液用1 ug poly(dI:dC)（dI:dC).为确定所形成的复合物的特异性,在含或不含增量的非放射性的特异竞争DNA或非特异的竞争DNA时,作结合反应的竞争实验.一般,非放射性的特异DNA是非标记的DNA探针,非特异的竞争DNA ,长度组成和DNA探针相同,序列不同.用非放射性的特异DNA能竞争掉,而用非特异的竞争DNA不能竞争掉的复合物,表明目的蛋白和同位素标记探针的特异结合.非特异结合能用特异DNA和非特异的竞争DNA竞争掉.结合溶液中的poly(dI:dC)（dI:dC)的量需作优化,但一般用0.05mg/ml.非放射性的（特异或非特异）的竞争DNA的用量也需优化或滴定,但竞争DNA通常是同位素标记的探针的10-1000倍（w/w）.其他类型的竞争DNA如小牛胸腺DNA不能用于凝胶迁移反应,它们会带有目的蛋白的结合位点.